肝片吸虫候选检测抗原基因筛选及假定蛋白D915000128的鉴定

作者：刘少雄; 张楠; 王晓岑; 李新; 李建华; 宫鹏涛; 张西臣^*

来源：中国病原生物学杂志, 2023, 18(03): 293-302.

DOI：10.13350/j.cjpb.230309

• 肝片吸虫
• 免疫学筛选
• 候选检测抗原基因
• 原核表达

目的 筛选肝片吸虫cDNA表达文库，获得肝片吸虫感染候选检测抗原基因，经对筛选结果分析后选取假定蛋白D915＿000128基因进行表达和反应原性鉴定。方法 利用绵羊肝片吸虫感染阳性血清对肝片吸虫cDNA表达文库进行筛选，以阳性噬菌斑为模板进行PCR扩增，对PCR产物测序并进行生物信息学分析和比较。通过PCR技术将选取的候选检测抗原基因片段进行扩增，并与原核表达载体pET-32a连接，构建重组表达质粒，经酶切鉴定正确后转化BL21感受态细胞，以异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，应用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白的大小及其反应原性进行分析和鉴定。结果 通过对肝片吸虫cDNA表达文库的筛选，成功获得了肝片吸虫候选检测抗原基因12个，其中2个为已报道的检测抗原基因(GenBank:PIS79729.1、ABC66278.1),10个为新发现的可用于肝片吸虫感染检测的候选抗原基因(GenBank:AYA57790.1、THD19001.1、TPP64335.1、PIS88126.1、AAA80273.1、THD26809.1、THD19926.1、TPP60711.1、THD26810.1、THD29021.1)。成功构建假定蛋白D915＿000128基因原核表达载体，其诱导表达产物经SDS-PAGE分析为85×103的重组融合蛋白，Western blot分析该重组蛋白可被绵羊肝片吸虫自然感染阳性血清识别，即具有反应原性。结论 筛选获得12个肝片吸虫候选检测抗原基因，分析比较选取了肝片吸虫假定蛋白D915＿000128基因，构建的原核表达载体表达的重组蛋白具有良好的反应原性。

• 单位
  吉林大学