甜菜TRAP-PCR反应体系的建立及引物开发策略

作者：吴则东; 刘乃新; 秦浩东; 倪洪涛; 马龙彪

来源：中国农学通报, 2016, 32(06): 96-101.

• 糖用甜菜
• TRAP-PCR
• 体系优化
• 引物开发策略

以糖用甜菜为材料,利用单因素实验探讨甜菜TRAP-PCR反应体系中d NTPs、引物、模板以及DNA聚合酶等4个因素的浓度变化对扩增结果的影响,最终建立糖用甜菜的最佳TRAP-PCR反应体系。结果表明,在20μL反应体系中,甜菜TRAP-PCR最优反应体系包含2.0μL的10×PCR buffer(含Mg2+)、10 ng的模板DNA、0.75 U的Taqase、10μmol/L固定引物及随机引物各0.8μL以及0.5μL的d NTPs(2.5 mmol/L each)。并建立了一种快速开发甜菜TRAP-PCR引物的方法,利用优化后的程序对15份糖甜菜品种进行扩增。结果表明,该体系扩增结果稳定、条带清晰,部分引物多态性丰富,可用于糖用甜菜品种指纹图谱的构建以及其他分子生物学领域的研究。

• 单位
  农业部; 中国农业科学院甜菜研究所; 黑龙江大学