HIV-1型整合酶蛋白的表达、纯化及复性研究

作者：马晶; 张晓光; 张晓梅; 郭秀婵; 曾毅

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2007, (10): 928-933.

• HIV-1
• 整合酶
• 原核表达
• 复性 HIV-1
• Integrase
• Prokaryotic expression
• Refolding

目的对HIV-1整合酶蛋白进行原核表达、纯化以及复性研究。方法从HIV-1 HXB2中PCR扩增出全长的整合酶基因,连入原核表达载体pET-30a中,得到pET-30a整合酶表达质粒。再将质粒转入大肠杆菌BL21中诱导表达,经镍柱纯化后得到整合酶蛋白。纯化后蛋白在FoldIt复性液中进行稀释复性确定最佳复性液,然后蛋白在此条件下复性并用反相柱回收,最后通过对复性蛋白抽干及再溶分析复性蛋白的物理稳定性。结果HIV-1整合酶蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总量的10%。经镍柱纯化后蛋白的总浓度为0.9 mg/ml。蛋白的最佳复性液是:Tris-Cl 55 mmol/L, NaCl 264 m...

• 单位
  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 传染病预防控制国家重点实验室