HCV亚基因组复制子细胞培养上清外泌体HCV RNA的分离及其与胞内病毒水平的相关性

作者：王江华; 费然; 王雪艳; 张海莹; 魏来

来源：中国病毒病杂志, 2016, 6(01): 17-21.

DOI：10.16505/j.2095-0136.2016.01.004

• 丙型肝炎病毒
• 复制子
• 外泌体
• 干扰素α

目的检测丙型肝炎病毒(HCV)复制子细胞培养上清中外泌体HCV RNA的稳定性和表达水平,并研究干扰素α抑制HCV复制过程中,外泌体HCV RNA水平与胞内病毒复制水平的相关性。方法建立G418筛选稳定表达的HCV复制子细胞模型HCV-Con I-Rep,比较超速离心和沉淀法对HCV RNA阳性外泌体的分离效果;实时定量PCR法检测培养上清的HCV RNA水平并评价其对表面活性剂NP-40和RNase A的敏感性;不同剂量干扰素α(0、0.4、2、10、50、250IU/ml)处理72h或100IU/ml干扰素α处理不同时间(0、6、12、24、48、72h),分别检测上清和胞内HCV RNA水平,并评价两者的相关性。结果成功构建了稳定表达的HCV复制子细胞模型;PEG沉淀较超速离心法能够更高效地分离外泌体;HCV复制子细胞培养上清外泌体中含有较高水平(~106 IU/ml)的HCV RNA,但在表面活性剂的存在下,可因外泌体脂质膜破坏而被RNase A降解;干扰素α处理过程中,胞内HCV RNA和上清中外泌体HCV RNA水平均显著降低;Spearman相关性分析提示,胞内HCV RNA和上清中外泌体HCV RNA在不同剂量干扰素处理组和不同处理时间组的水平均具有显著相关性(r=0.9690,P<0.01和r=0.7069,P=0.001)。结论 HCV亚基因组复制子细胞培养上清外泌体HCV RNA水平可作为更方便检测的指标,反映胞内病毒复制水平的变化。

• 单位
  北京大学; 北京大学人民医院