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摘要
目的应用物理方法构建正常人肝细胞株7702细胞的低氧饥饿自噬模型,为研究细胞自噬对肝脏功能的影响机制奠定基础。方法选用7702细胞,使用完全DMEM培养基,在37℃和5%CO2培养箱中培养(正常对照组),使用Binder三气培养箱,设置温度为37℃,CO2浓度为5%、O2浓度为0.3%来提供缺氧环境,使用无血清DMEM培养细胞来诱导饥饿,将其分为低氧饥饿6、12、18和24 h 4个时间组。用Western Blot检测正常对照组和不同时间点实验组的Beclin-1、Atg5以及LC3蛋白表达水平的变化;通过实时荧光定量PCR法检测各组Beclin-1 mRNA、Atg5 mRNA的表达;转染LC3质粒后利用免疫荧光法观察各组细胞发生自噬的情况。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;计数资料组间比较采用χ2检验。结果低氧饥饿处理6 h组的Beclin-1、Atg5及LC3的蛋白表达量高于正常对照组及其他处理组;低氧饥饿6 h组较其他各组的Beclin-1mRNA和Atg5 mRNA的表达量显著增高,且其增高最显著,差异均有统计学意义(P值均<0.05);低氧饥饿组自噬小体数量均高于正常对照组,其中低氧饥饿6 h组的自噬小体数量最高,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论通过物理方法构建的低氧饥饿可以诱导7702细胞发生自噬,并且在低氧饥饿6 h时,细胞发生自噬最为明显。
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单位首都医科大学附属北京佑安医院
