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摘要
构建1株能够表达凋亡素的重组减毒单增李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM），并探究其对B16F10小鼠黑色素瘤细胞增殖活力的影响。利用同源重组技术将凋亡素编码序列定点整合至单增李斯特菌hly基因信号肽下游，用RT-PCR及Western-blot方法验证重组菌株LMΔhly::apoptin中凋亡素的转录与表达，最后测定重组菌株的生物学特性，并通过CCK-8及荧光显微镜探究了重组菌株对B16F10细胞增殖活力及凋亡水平的影响。RT-PCR及Western-blot结果表明，该重组菌株能够转录并分泌表达具有免疫反应性的凋亡素。重组菌株对B16F10细胞的侵袭率为5.11%±0.56%，显著低于野生株对B16F10细胞的侵袭率（19.17%±4.83%）(P<0.05)，但具有较好的胞内增殖能力，且在B16F10细胞内能检测到凋亡素的表达。CCK-8结果表明重组菌株能够显著抑制B16F10细胞的增殖，经荧光染色观察到重组菌株可诱导B16F10肿瘤细胞凋亡。本研究成功构建了表达凋亡素的重组减毒单增李斯特菌，其能够侵袭B16F10细胞并在细胞内增殖，且能在B16F10细胞中有效表达凋亡素。该重组菌株通过促进B16F10细胞凋亡而抑制B16F10细胞的增殖。以上研究为开发新型单增李斯特菌活载体肿瘤疫苗奠定了基础。
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