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摘要
松墨天牛(Monochamus alternatus)是松材线虫病的主要传播媒介。建立高效的RNAi体系将有助于松墨天牛功能基因组的研究。本研究设计了松墨天牛Laccase 2基因的RNAi位点，分别利用体外转录和化学合成制备dsRNA和siRNA,并对其注射条件和注射龄期进行优化，结合表型观察和RT-qPCR验证RNAi沉默效果。结果表明，注射1μg和10μg dsRNA的蛹均出现羽化后畸形，无色素沉着且无法进行正常活动，而注射4μg siRNA的松墨天牛与对照组无明显差异。RT-qPCR表达分析发现，Laccase 2在蛹期到成虫期的表达量较高，老熟蛹中达到最高。对松墨天牛第1天的蛹注射dsRNA后，其Laccase 2的表达受到显著抑制，沉默效率可达70%左右。利用Laccase 2基因的dsRNA对松墨天牛中靶基因的表达量进行抑制，在蛹期注射1μg即可达到理想沉默效果，而siRNA注射在松墨天牛中没有效果。本研究结果为进一步基于功能基因组学开展研究提供技术支持，为松墨天牛生物防治提供新的方向。
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