血浆外泌体提取方法的比较

作者：吕丽华; 朱丽娜; 王皓; 杨文静; 金安莉; 王蓓丽; 潘柏申; 郭玮^*

来源：检验医学, 2020, 35(12): 1224-1228.

• 外泌体
• 超速离心法
• 膜亲和法
• 沉淀法

目的比较超速离心法、膜亲和法、沉淀法提取血浆外泌体的效率。方法分别采用超速离心法、膜亲和法、沉淀法提取血浆外泌体。采用透射电子显微镜、纳米流式检测仪和动态光散射法检测外泌体的形态、颗粒数、粒径分布及Zeta电位,采用免疫印迹法鉴定外泌体标志性蛋白的表达,采用二喹啉甲酸(BCA)法测定外泌体蛋白浓度,分析颗粒数/蛋白总量比值以评估外泌体的提取纯度。结果超速离心法、沉淀法和膜亲和法提取的外泌体在透射电子显微镜下均能观察到其立体膜结构,大小为40～100 nm,但沉淀法提取的外泌体混有聚乙二醇(PEG)聚合物及蛋白大颗粒。亲和法提取的外泌体直径大于超速离心法和沉淀法(P<0.05)。动态光散射法结果显示3种方法提取的外泌体的Zeta电位均为负值,但测得的外泌体直径偏大。免疫印迹法结果显示3种方法提取的外泌体均表达标志性蛋白。沉淀法提取的血浆外泌体蛋白总量和外泌体颗粒数均高于超速离心法和膜亲和法(P<0.05)。超速离心法的提取纯度高于膜亲和法和沉淀法(P<0.05)。结论超速离心法、膜亲和法和沉淀法均能提取出血浆外泌体,应根据实验需求选择合适的方法。

• 单位
  复旦大学附属中山医院