莱茵衣藻BBS8蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

作者：李文娟; 贾航; 薛斌; 樊振川^*

来源：水生生物学报, 2022, 46(09): 1319-1324.

• BBS8
• 多克隆抗体
• 莱茵衣藻
• 巴德-毕德氏症复合物

为制备一支高特异性的莱茵衣藻BBS8兔源多克隆抗体,研究首先在大肠杆菌中表达N-端6×His标签标记的BBS8融合蛋白(6×His::BBS8)并对其进行镍柱纯化,而后将纯化所得6×His::BBS8蛋白免疫新西兰大白兔。免疫3次后采集少量抗血清,利用间接ELISA法测定其效价为1﹕102400。然后,利用protein A纯化珠对所得BBS8抗血清进行IgG亚型抗体富集,接着利用大肠杆菌表达和纯化所得N-端MBP标签标记的BBS8(MBP::BBS8)对IgG抗血清进行抗原抗体亲和纯化。利用纯化后的anti-BBS8多克隆抗体对莱茵衣藻野生型CC-125和bbs8突变体藻种的全细胞蛋白提取物进行免疫印迹鉴定,所得anti-BBS8多克隆抗体特异性较高,适合用于后续莱茵衣藻BBS8蛋白功能的研究。

• 单位
  天津科技大学; 生物工程学院