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摘要
目的研究山柰酚逆转人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/阿霉素(ADR)耐药机制。方法 (1)将MCF-7和MCF-7/ADR细胞分为空白组(培养基)、对照组(细胞、培养基)和实验组。实验组分别用含不同浓度(20, 50, 100, 150, 200, 300, 400, 500μmol·L-1)山柰酚的培养基培养,每组分别干预24,48和72 h。干预后MTT法测定细胞存活率。(2)将MCF-7和MCF-7/ADR细胞分为空白组(培养基)、对照组(细胞、培养基)和联合组,联合组分别用含有不同浓度(3, 6, 12, 24, 48μmol·L-1)阿霉素、不同浓度(3, 6, 12, 24, 48μmol·L-1)紫杉醇和不同浓度(10, 30, 60, 90, 120μmol·L-1)顺铂的培养基培养,干预48 h。MTT法测定细胞存活率,计算IC50和耐药倍数。(3)将MCF-7/ADR细胞分为ADR组和低、中2个浓度ADR联用组(ADR+山柰酚20, 50μmol·L-1);紫杉醇组和低、中2个浓度紫杉醇联用组(紫杉醇+山柰酚20, 50μmol·L-1);顺铂组和低、中2个浓度顺铂联用组(顺铂+山柰酚20, 50μmol·L-1),计算IC50和逆转耐药倍数。(4)细胞分为MCF-7组与MCF-7/ADR组;再将MCF-7/ADR细胞分为4组:空白组和低、中、高3个浓度山柰酚组(山柰酚:20, 50, 100μmol·L-1)。蛋白质印迹法测定核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制剂(I-κB)、多药耐药蛋白(ABCB1)和乳腺癌耐药蛋白(ABCG2)蛋白表达水平(灰度值比值)。结果 (1)山柰酚显著抑制MCF-7和MCF-7/ADR细胞存活率,与空白组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)MCF-7细胞:ADR组、紫杉醇组和顺铂组的IC50分别为(1.84±0.22),(1.76±0.12)和(0.78±0.53)μmol·L-1。MCF-7/ADR细胞:这3组的IC50分别为(43.68±0.76),(85.93±9.04)和(203.20±5.08)μmol·L-1。2种细胞的IC50相比差异均有统计学意义(均P<0.01)。上述3种药物在MCF-7/ADR细胞的耐药倍数分别为23.66,9.50和257.86。(3)MCF-7/ADR细胞:ADR组和低、中2个浓度联合组的IC50分别为(43.68±0.76),(17.68±3.14)和(23.51±0.06)μmol·L-1,低、中2个浓度联合组与ADR组相比差异有统计学意义(P<0.01);这3组的耐药逆转倍数分别为1.00,2.47和1.86。紫杉醇组和低、中2个浓度联用组的IC50分别为(85.93±9.04),(43.50±1.11)和(37.80±1.06)μmol·L-1,与紫杉醇组相比差异有统计学意义(P<0.01),这3组耐药逆转倍数分别为1.00,1.98,2.27。顺铂组和低、中2个浓度联用组IC50分别为(203.20±5.08),(54.81±4.11)和(30.57±0.70)μmol·L-1,与顺铂组相比差异有统计学意义(P<0.01),这3组耐药逆转倍数分别为1.00,3.71和6.65。(4)NF-κB在MCF-7组与MCF-7/ADR组的表达分别为3.10±0.50,8.40±1.95;ABCB1在2组的表达分别为1.27±0.26,3.39±0.44;ABCG2在2组的表达分别为0.65±0.27,1.62±0.23,上述指标在2组比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。MCF-7/ADR细胞:空白组、低、中、高3个浓度组的NF-κB表达分别为1.33±0.29,0.98±0.14,0.81±0.11和0.64±0.05;ABCB1在上述4组中表达分别为0.74±0.02,0.69±0.06,0.58±0.02和0.52±0.05,与空白组相比,中、高2个浓度组差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。I-κB在上述4组中表达分别为0.99±0.06,1.16±0.091.23±0.03和0.96±0.11,与空白组相比,中浓度组差异有统计学意义(P <0.05); ABCG2在上述4组中表达分别为0.13±0.07,0.47±0.15,0.35±0.09和0.16±0.21,与空白组相比,高浓度组差异有统计学意义(P <0.05)。结论山柰酚能够逆转MCF-7/ADR细胞对不同药物的耐药性,其作用机制可能与山柰酚降低ABCB1蛋白的表达和抑制NF-κB表达有关。
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单位新疆医科大学; 中心实验室
