科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
基于氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)/活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)/核转录因子κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)信号通路探究黑逍遥散对APP/PS1双转基因小鼠小胶质细胞(microglia, MG)极化的影响及作用机制。4月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠50只，随机分为模型组、MCC950组(10 mg·kg-1)及黑逍遥散低、中、高剂量组(6.45、12.89、25.78 g·kg-1),同月龄、同系种雄性C57BL/6J小鼠30只，随机分为空白组、空白灌胃干预组和空白腹腔注射组，各组给药干预90 d。Morris水迷宫检测学习认知能力，尼氏染色和透射电镜观察海马神经元病理形态和超微结构，免疫荧光检测小胶质细胞M1型标志物CD16/32+/Iba-1+、M2型标志物CD206+/Iba-1+的阳性表达及海马ROS表达情况，比色法检测海马丙二醛(malondialdehyde, MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)含量，酶联免疫吸附法检测海马白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)炎症因子含量，蛋白免疫印迹检测海马β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein, Aβ)、Iba-1、CD16/32、CD206、NOX2、NF-κB、p-NF-κB、核因子κB抑制蛋白α(NF-κB inhibitor alpha, IκBα)和p-IKBα蛋白表达。结果显示，与空白组比较，模型组小鼠目标象限运动距离、逃避潜伏期显著延长(P<0.01),目标象限滞留时间及百分比显著缩短(P<0.01);神经元细胞排列紊乱，出现肿胀、核消失或偏置，细胞数量明显减少，尼氏小体溶解甚至消失，胞质呈透亮区域；细胞膜出现缺损、皱缩，形态异常，胞质中少见细胞器，线粒体明显肿大，数量减少；小胶质细胞M1型标志物CD16/32+/Iba-1+显著升高(P<0.01),M2型标志物CD206+/Iba-1+显著降低(P<0.01),ROS活性和MDA含量显著升高(P<0.01),SOD水平显著降低(P<0.01),炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α含量显著升高(P<0.01);Aβ、CD16/32、Iba-1、NOX2、NF-κB和IKBα蛋白表达及磷酸化显著升高(P<0.01),CD206显著降低(P<0.01)。空白组与空白灌胃干预组、空白腹腔注射组差异无统计学意义。黑逍遥散干预后，各剂量组小鼠目标象限运动距离和逃避潜伏期显著缩短(P<0.01),目标象限滞留时间及百分比显著延长(P<0.01);细胞数量明显增多，排列较为整齐，肿胀明显缓解，尼氏小体增加；细胞形态较为规则，胞膜较为完整，线粒体肿胀明显缓解，但仍有部分内质网轻度扩张；M1型标志物CD16/32+/Iba-1+显著降低(P<0.05或P<0.01),M2型标志物CD206+/Iba-1+显著升高(P<0.01),ROS活性、MDA含量显著降低(P<0.01),SOD水平显著升高(P<0.01),炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α含量显著降低(P<0.01);Aβ、CD16/32、Iba-1、NOX2、NF-κB、IKBα蛋白及其磷酸化显著降低(P<0.01),CD206显著升高(P<0.01)。综上所述，黑逍遥散能够缓解神经元损伤，提高APP/PS1小鼠学习记忆能力，作用机制可能与抑制NOX2/ROS/NF-κB信号通路，调节MG极化，增加M2型表达，抑制M1型表达，减少炎症因子释放有关。
- 单位
