牛病毒性腹泻病毒衣壳蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

作者：张忠辉; 高闪电^*; 独军政; 田占成; 王建东; 殷宏^*

来源：畜牧与兽医, 2020, 52(07): 78-82.

• 牛病毒性腹泻病毒
• 衣壳蛋白
• 表达
• 多克隆抗体

试验旨在通过原核表达获得牛病毒性腹泻病毒(BVDV)衣壳蛋白(C),以制备抗C蛋白多克隆抗体。根据BVDV C蛋白的编码序列设计一对特异性引物,利用PCR扩增编码BVDV C蛋白片段,定向插pPET-42a载体中,转化大肠杆菌BL21 Rosetta (DE3) pLysS感受态细胞,筛选重组阳性菌株,IPTG诱导表达,金属离子层析法纯化得到分子质量为45 kDa的重组C蛋白。利用纯化的重组C蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测多克隆抗体效价达到1∶25 600。经间接免疫荧光证实制备的多克隆抗体可与细胞中的BVDV抗原发生反应,具有良好的反应性。本研究成功制备了BVDV重组C蛋白的兔源多克隆抗体,为BVDV衣壳蛋白功能的研究奠定了基础。

• 单位
  宁夏农林科学院动物科学研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心