低氘水对人黑色素瘤A375细胞增殖、迁移、凋亡的调控作用及其机制探讨

作者：吴斯敏; 林贤桂; 杜歆玥; 杨慧龄^*

来源：山东医药, 2022, 62(08): 1-5.

• 低氘水
• 黑色素瘤
• 细胞增殖
• 细胞迁移
• 细胞凋亡
• 细胞周期
• Caspase

目的 观察低氘水（DDW）对人黑色素瘤A375细胞增殖、迁移、凋亡的调控作用，并探讨相关机制。方法 A375细胞与人角质形成细胞HaCaT分别用氘体积分数为0.002 5%、0.005 0%、0.010 0%的DDW和超纯水（氘体积分数0.015 0%）配成的高糖DMEM培养基培养。采用细胞增殖实验和平板克隆形成实验检测A375细胞和HaCaT细胞的增殖能力，采用划痕实验检测两种细胞迁移能力，DAPI染色观察两种细胞形态变化。采用流式细胞仪检测A375细胞凋亡和细胞周期分布情况，ATP酶测试盒检测A375细胞Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶、总ATP酶活性，采用Western blotting法检测A375细胞中的凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax）及Caspase通路蛋白（Caspase-3、cleaved Caspase-3、Caspase-9、cleaved Caspase-9、PARP、cleaved PARP）。结果 与超纯水处理相比，0.010 0%、0.005 0%、0.002 5%氘体积分数的DDW处理的A375细胞增殖抑制率依次增高，克隆形成率和细胞迁移率依次降低（P均<0.05);DDW处理的A375细胞出现核染色质固缩、凝聚、核碎裂等现象，细胞核中凋亡小体增多。DDW对Ha Cat细胞的增殖能力、集落形成能力、细胞迁移能力及细胞形态没有明显影响。与超纯水处理相比，0.010 0%、0.005 0%、0.002 5%氘体积分数的DDW处理的A375细胞凋亡率及G_0/G_1期细胞比例依次增高，G_2/M期细胞比例依次降低（P均<0.05）。与超纯水处理相比，0.010 0%、0.005 0%、0.002 5%氘体积分数的DDW处理的A375细胞Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶、总ATP酶活性及Bcl-2、Caspase-9、PARP蛋白表达依次降低，Bax、cleaved Caspase-3/9、cleaved PARP蛋白表达依次增高（P均<0.05）。结论 低氘水能选择性地抑制A375细胞增殖、迁移并诱导细胞凋亡，呈剂量依赖性，而对人角质形成细胞无明显影响；低氘水的作用机制可能与抑制ATP酶活性、激活Caspase信号通路有关。

• 单位
  东莞市食品药品检验所; 广东医科大学