高分辨熔解曲线技术在Wilson病致病基因突变鉴定中的应用

作者：张静; 刘彦山; 赵秀丽; 张学

来源：基础医学与临床, 2016, 36(02): 218-221.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2016.02.013

• 肝豆状核变性
• ATP7B基因
• 聚合酶链反应
• 高分辨熔解曲线分析
• 产前基因诊断

目的在一个肝豆状核变性(WD)家系中进行致病突变鉴定和产前基因诊断。方法酚-氯仿法提取外周全血或妊娠13周胎儿绒毛组织基因组DNA;利用PCR-Sanger测序技术对先证者ATP7B基因外显子及外显子/内含子衔接区序列进行突变分析;针对先证者携带的突变位点,应用聚合酶链反应(PCR)-高分辨熔解曲线(HRM)方法对先证者家系4名成员进行突变鉴定,并在此基础上为患儿母亲提供产前基因诊断。结果先证者ATP7B基因第8外显子存在纯合致病突变c.2333G>T(p.R778L);该家系5名成员和4名群体正常样本分属于3种不同熔解曲线。HRM分析结果与测序结果一致,即:患儿本人为R778L的纯合子,其父母、姐姐和母亲产前诊断的胎儿均为突变杂合子,4名群体正常对照为纯合野生型。结论在一个WD家系中检测到ATP7B基因热点突变c.2333G>T(p.R778L),并针对该突变建立了一种基于PCR-HRM技术的快速突变鉴定方法,成功为家系提供产前基因诊断。

• 单位
  医学分子生物学国家重点实验室; 中国医学科学院基础医学研究所; 北京协和医学院