miR-24对过氧化氢诱导的HLE-B3细胞凋亡的影响及其与线粒体Smac/Diablo-XIAP-caspase-9/3凋亡途径的关系

作者：闫利霞; 黄晓; 张鑫; 郑广瑛

来源：眼科新进展, 2021, 41(05): 417-421.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2021.0087

• 微小RNA-24
• 过氧化氢
• 人晶状体上皮细胞
• 胱天蛋白酶激活因子
• 低等电位点的凋亡抑制蛋白
• 细胞凋亡

目的探讨微小RNA-24(miR-24)对过氧化氢(H2O2)诱导的HLE-B3细胞凋亡的影响,分析其与线粒体中第二个线粒体衍生的胱天蛋白酶激活因子/低等电位点的凋亡抑制蛋白的直接结合蛋白(the second mitochondria-derived activator of caspase/direct IAP-binding protein with low PI,Smac/Diablo)-XIAP-caspase-9/3凋亡途径的关系。方法将HLE-B3细胞分为对照组、H2O2组、H2O2+miR-24 NC组和H2O2+miR-24抑制剂组。先按照miR-24抑制剂、miR-24 NC试剂盒说明书转染H2O2+miR-24抑制剂组和H2O2+miR-24 NC组细胞24 h,然后向H2O2组、H2O2+miR-24 NC组和H2O2+miR-24抑制剂组HLE-B3细胞中加入200μmol·L-1 H2O2干预24 h,收集细胞用于后续实验;将正常培养的HLE-B3细胞设置为对照组。采用实时荧光定量PCR检测各组HLE-B3细胞miR-24表达情况,CCK-8法检测各组HLE-B3细胞生长情况,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,计算各组细胞存活率和细胞凋亡率。采用荧光探针JC-1法检测线粒体膜电位变化情况(利用红绿荧光强度比反映线粒体膜电位);采用蛋白免疫印迹法检测各组HLE-B3细胞线粒体和细胞质分级中Smac/Diablo及细胞质分级中XIAP、caspase-9和caspase-3蛋白表达情况。对所得数据进行统计学分析。结果当H2O2浓度大于200μmol·L-1时,细胞存活率均小于50%,本实验以200μmol·L-1作为最适H2O2浓度。对照组、H2O2组、H2O2+miR-24 NC组和H2O2+miR-24抑制剂组细胞miR-24相对表达量分别为1.04±0.02、2.73±0.09、2.69±0.07和1.15±0.06;与对照组相比,H2O2组细胞中miR-24表达升高(P<0.05);与H2O2组和H2O2+miR-24 NC组相比,H2O2+miR-24抑制剂组中miR-24表达降低(均为P<0.05),但H2O2组与H2O2+miR-24 NC组中miR-24表达差异无统计学意义(P>0.05)。与H2O2组和H2O2+miR-24 NC组相比,H2O2+miR-24抑制剂组细胞存活率显著升高、细胞凋亡率显著降低(均为P<0.05),但H2O2组与H2O2+miR-24 NC组细胞存活率和细胞凋亡率差异均无统计学意义(均为P>0.05)。对照组、H2O2组、H2O2+miR-24 NC组和H2O2+miR-24抑制剂组红绿荧光强度比分别为0.24±0.02、0.12±0.02、0.15±0.03、0.31±0.06。与对照组相比,H2O2组红绿荧光强度比降低(P<0.05);与H2O2组和H2O2+miR-24 NC组相比,H2O2+miR-24抑制剂组红绿荧光强度比均升高(均为P<0.05),但H2O2组与H2O2+miR-24 NC组红绿荧光强度比比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与H2O2组和H2O2+miR-24 NC组相比,H2O2+miR-24抑制剂组线粒体分级中Smac/Diablo蛋白及细胞质分级中XIAP蛋白表达升高(均为P<0.05),细胞质分级中Smac/Diablo、caspase-9和caspase-3蛋白表达降低(均为P<0.05),但H2O2组与H2O2+miR-24 NC组线粒体、细胞质分级中Smac/Diablo蛋白及细胞质分级中XIAP、caspase-9和caspase-3蛋白表达相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 miR-24可能通过抑制线粒体Smac/Diablo-XIAP-caspase-9/3凋亡途径,抑制H2O2诱导的HLE-B3细胞凋亡。

• 单位
  郑州大学第一附属医院; 开封市中心医院