人衰变加速因子DAF基因真核表达系统的构建

作者：徐莉; 赵舟宙; 刘辉; 李文鑫

来源：中国免疫学杂志, 2008, (12): 1116-1120.

• 衰变加速因子
• NIH3T3细胞
• 稳定转染
• 真核表达 DAF
• NIH3T3 cell
• Stable transfection
• Eukaryotic expression

目的:构建含人补体调节蛋白衰变加速因子DAF分子的cDNA编码区的真核重组表达载体pcDNA3-DAF,转染NIH3T3细胞,建立稳定表达人DAF的NIH3T3细胞模型。方法:将人DAF分子的cDNA编码区克隆到真核表达载体pcDNA3,经酶切和测序鉴定后用磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的NIH3T3细胞株。用PCR检测人DAF基因在NIH3T3细胞基因组中的整合;用RT-PCR、Westernblot实验和间接免疫荧光技术分别从RNA水平和蛋白质水平检测人补体调节蛋白分子DAF在细胞株中的表达。结果:成功构建了pcDNA3-DAF重组真核表达载体,并建立了稳...

• 单位
  武汉大学; 生命科学学院; 病毒学国家重点实验室