卵清蛋白多克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立

作者：李妮; 朱文勇; 宋绍辉; 钏鸿云; 吴雅楠; 赵蕊蕊; 廖国阳^*

来源：医学研究杂志, 2021, 50(12): 55-59.

• 卵清蛋白
• 多克隆抗体
• 双抗体夹心ELISA

目的 建立卵清蛋白(ovalbumin, OVA)双抗体夹心ELISA检测方法并进行验证，用于定量检测鸡胚流感疫苗中的OVA含量。方法 建立双抗体夹心酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA),对该方法的反应条件进行优化，确定定量范围及检测下限，并对重复性、特异性和准确度进行验证。结果 建立的方法最适包被抗体和酶标抗体浓度分别为2.5μg/ml和0.5μg/ml,最适封闭液配方为1%BSA+1%蔗糖。该方法的cut-off值为0.134,线性范围为0.313-20.000ng/ml,定量下限为0.078ng/ml。重复性好，板内变异系数为3.428%～25.953%,板间变异系数为5.375%～27.614%。特异性好，准确度高，检测结果与试剂盒检测结果符合率为91.43%～102.96%。稳定性好，预包被的酶标板冻存于-20℃,半年内检测样本变异系数为1.976%～14.409%。结论 建立了快速、简便、低成本的OVA定量检测方法，可用于鸡胚流感疫苗中OVA定量检测。

• 单位
  中国医学科学院医学生物学研究所