小干扰RNA抑制MG-63细胞cyclin A2基因的表达

作者：刘叶; 丁佳逸; 沈炜亮; 赵兴; 范顺武

来源：中华肿瘤杂志, 2007, 29(09): 670-675.

DOI：10.3760/j.issn:0253-3766.2007.09.008

• siRNA
• cyclin A2
• G0／G1期阻滞
• MG-63细胞

目的利用小干扰RNA(siRNA)抑制骨肉瘤及正常成纤维细胞中cyclin A2基因的表达,并观察其对细胞生物活性的影响。方法设计并化学合成3对针对cyclin A2基因的siRNA,用Oligofectamine分别将其转染到骨肉瘤细胞系MG-63及正常人成纤维细胞HSF中,以无义siRNA转染作为阴性对照;以real-time PCR、Western blot检测cyclin A2基因沉默效果,采用MTT、RT-PCR、流式细胞、克隆培养等方法评价抑制cyclin A2基因表达后细胞的生长状态,同时检测PCNA及cyclin B1表达的改变。结果3对siRNA均能使cyclin A2 mRNA的表达降低,其中siRNA,抑制率最高。在骨肉瘤细胞MG-63中,转染50 nmol/L的siRNA,48 h后,cyclin A2的mRNA及蛋白表达被抑制近80%,这导致细胞增殖抑制,80.1%的细胞被阻滞在G0/G1期,克隆形成能力下降至45.5%,同时,PCNA及cyclin B1的mRNA表达明显降低。对正常成纤维细胞HSF,虽然siRNA1能抑制近60%的cyclin A2 mRNA及蛋白表达,但细胞的增殖及克隆形成能力未受影响。结论针对cyclin A2基因的siRNA能有效降低细胞中cyclin A2 mRNA及蛋白的表达,抑制骨肉瘤细胞的生长,而对正常细胞影响不大。表明cyclin A2是骨肉瘤细胞增殖所依赖的关键基因,抑制其表达有望成为治疗骨肉瘤的新途径。

• 单位
  浙江大学; 浙江大学医学院附属邵逸夫医院