恒河猴血清SARS-CoV-2变异株特异性IgG抗体间接ELISA检测方法的建立及验证

作者：张文劲; 李庆妮; 唐定; 陈云丰; 华婉璐; 刘元浪; 李新国^*; 卢佳^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(11): 1341-1352.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.004037

• 恒河猴
• SARS-CoV-2变异株
• 特异性IgG抗体
• 间接ELISA法

目的 建立恒河猴血清SARS-CoV-2变异株特异性IgG抗体的间接ELISA检测方法，并进行验证。方法 以SARS-CoV-2 Beta变异株灭活疫苗为包被抗原建立特异性IgG抗体的间接ELISA检测方法，并优化方法的抗原包被浓度（1、2、4μg/mL）、待检血清稀释度（1∶800～1∶12 800）、PBST封闭液（含1%BSA、2%BSA、1%脱脂奶、2%脱脂奶、1%BSA+1%脱脂奶）、封闭时间（30、60、90 min）、二抗稀释度（1∶5 000、1∶10 000、1∶15 000、1∶20 000）、血清及二抗孵育时间（30、60、90 min）、TMB显色反应时间（5、10、15、20、25、30 min）。采用建立的方法检测60份恒河猴阴性血清，确定阴、阳性临界值。验证该方法的敏感性及精密性。采用建立的方法及微量中和试验分别检测44份恒河猴血清抗SARS-CoV-2 Beta变异株特异性IgG抗体及中和抗体水平，并比较二者的相关性和一致性。结果 确定最佳检测条件：抗原包被浓度为1μg/mL；封闭液为含1%脱脂奶粉的PBST，封闭时间为30 min；待检血清稀释度为1∶1 600，孵育时间为90 min，二抗稀释度为1∶10 000，孵育时间为30 min；底物显色时间为25 min。该方法的阳性临界值为0.093，阴性临界值为0.084，位于两者之间判为可疑。5份阳性血清测得阳性结果的血清稀释倍数均为1∶51 200；精密性验证变异系数（CV）均<15%。44份恒河猴血清IgG抗体效价与中和抗体水平之间呈强相关（r=0.858 0,P <0.000 1）；两种方法总符合率为90.9%，阳性符合率为93.6%，阴性符合率为84.6%；一致性检验Kappa为0.783 8(95%CI:0.586 5～0.981 0)。结论 建立的恒河猴血清SARS-CoV-2变异株特异性IgG抗体间接ELISA检测方法具有良好的敏感性和精密性，与微量中和试验具有较强一致性，可用于恒河猴血清IgG抗体的检测。

• 单位
  武汉生物制品研究所有限责任公司