犬弓形虫抗体间接ELISA检测方法的建立

作者：柳方远; 印春生; 李双星; 单虎; 才学鹏; 刘业兵^*

来源：中国兽医学报, 2021, 41(06): 1074-1093.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.06.07

• 犬
• 弓形虫
• 原核表达
• 间接ELISA

为建立犬弓形虫抗体间接ELISA(iELISA)诊断方法,本研究对弓形虫TgCyP基因进行重组表达,纯化获取重组蛋白并进行Western blot检测,方阵滴定法确定纯化好的重组蛋白抗原最佳包被质量浓度和血清稀释度,优化包被条件、酶标二抗稀释度、封闭液和封闭时间等,建立犬弓形虫抗体iELISA诊断方法,并对建立的iELISA检测方法进行重复性、敏感性、特异性试验和临床检测。结果显示,抗原最佳包被质量浓度为1 mg/L,最佳包被条件为4℃包被过夜,最佳封闭条件为5%脱脂奶粉37℃作用2 h。待检血清以1∶200稀释后37℃作用60 min效果最佳,酶标二抗以1∶4 000稀释后37℃孵育60 min效果最佳。临界值为0.298,待检血清D450 nm值>0.298则确定为阳性。重复性试验中变异系数均低于10%,具有良好的稳定性;与CPIV、RABV、CDV、CPV、CAV阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性;将犬弓形虫阳性血清稀释至1∶6 400仍显示为阳性,敏感性好。应用建立的iELISA和金标准MAT对226份犬的临床血清进行检测,阳性率分别为24.34%和29.64%,两者符合率达94.70%。本试验建立了一种快速有效的诊断犬弓形虫抗体的iELISA方法,为犬感染弓形虫病的检测奠定基础。

• 单位
  中国兽医药品监察所; 青岛农业大学