非洲猪瘟CD2v截短蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

作者：胡巧云; 黄小久; 唐小明; 何世成; 林源; 彭志; 石建; 王卫国; 刘道新; 王昌建^*

来源：中国兽医学报, 2022, 42(06): 1103-1108.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.06.01

• 非洲猪瘟
• CD2v截短蛋白
• 间接CD2v-ELISA

为建立非洲猪瘟(ASF)抗体检测方法,本研究根据ASFV HLJ18株基因组序列合成CD2v蛋白的胞外区段基因序列,连接至原核表达载体p ET28a,构建表达质粒p ET28a-CD2v。经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)p Lys S,构建表达菌株p ET28a-CD2v/BL21(DE3)PLys S。经IPTG诱导和镍柱纯化后,获得纯化的CD2v蛋白并经SDS-PAGE和Westernblot鉴定。以纯化的CD2v蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件建立检测CD2v抗体的间接ELISA方法,并评价该方法的特异性、敏感性和重复性及在临床血清中的应用。结果显示,经测序构建的表达质粒序列正确,CD2v蛋白表达经SDS-PAGE可见略小于25k Da的条带,Westernblot显示能与ASFV感染血清发生特异性反应。建立了ASFCD2v蛋白抗体检测方法CD2v-ELISA,抗原包被质量浓度为50μg/L,血清稀释倍数为1∶100,羊抗猪HRP-Ig G稀释倍数为1∶100000,阴阳性临界值为0.26;与PRRSV、CSFV、PRV(g I)、PRV(gb)、FMDV血清不发生反应,具有良好的特异性;ASF阳性血清稀释至128000倍后仍检测为阳性,具有较高的敏感性;重复性结果显示,批间和批内变异系数均小于10%。使用CD2v-ELISA检测154份临床血清,阳性结果74份,阳性率为48.05%。与2个国产、2个进口商品化ASFV抗体试剂盒的检测结果比较,CD2v-ELISA方法跟其他方法的符合率较高,分别为95.45%,94.16%,88.31%,93.51%。因此,本研究成功建立了基于CD2v胞外区段抗原的ELISA方法,可用于ASF临床抗体的检测。

• 单位
  湖南省动物疫病预防控制中心