miR-296-5p在糖尿病肾病db/db小鼠血浆外泌体中的表达及功能

作者：刘苏^*; 徐巍龙; 查敏; 李楠; 周静波; 叶丽芳

来源：南京医科大学学报(自然科学版), 2022, 42(01): 14-22.

• 血浆外泌体
• 糖尿病肾病
• Snail1
• 上皮细胞-间充质转化

目的:明确miR-296-5p在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)db/db小鼠血浆外泌体中的表达并初探其在转录因子Snail1介导的上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用。方法:先后采集12只12周龄db/db小鼠(模型组)和12只12周龄db/m小鼠(对照组)血浆,提取外泌体RNA进行测序,利用生物信息学软件筛选靶向Snail1的差异miRNA;利用透视电镜、纳米颗粒跟踪分析鉴定外泌体;并通过小鼠肾组织及血浆外泌体验证获得目标miRNA,双荧光素酶实验明确其与Snail1的靶向关系,RT-qPCR和免疫组化检测db/db小鼠和db/m小鼠肾组织中Snail1、钙黏附蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)基因和蛋白的表达。结果:miR-296-5p在db/db小鼠血浆外泌体及肾组织中表达下调(P=0.011,P=0.001);双荧光素酶实验证实miR-296-5p与Snail1的靶向关系;db/db小鼠肾组织中Snail1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.001,P=0.005),E-cadherin mRNA和蛋白表达降低(P=0.012,P=0.020),α-SMA m RNA表达增加(P=0.042)。结论:miR-296-5p在db/db小鼠血浆外泌体中低表达,进而可能通过血浆外泌体递送,靶向上调肾小管上皮细胞Snail1,诱导肾小管上皮细胞EMT,加速DN肾间质纤维化。

• 单位
  南京中医药大学