敲除Spt7对黑曲霉生长及菌落形态的影响

作者：王一川; 张香香; 王静然; 王德培; 薛鲜丽^*

来源：微生物学报, 2023, 63(02): 855-867.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.20220501

• 黑曲霉
• 基因敲除
• Δspt7菌株
• 菌落形态
• 抗氧化胁迫

在酵母中Spt7作为一种多功能蛋白复合物Spt-Ada-Gcn5-乙酰转移酶(Spt-Ada-Gcn5-acetyltransferase, SAGA)复合体的核心蛋白，其不仅负责维持SAGA复合物的稳定，还负责细胞内10%以上的基因转录。除此之外，丝状真菌中关于Spt7功能的研究很少。【目的】探究Spt7在黑曲霉Aspergillus niger CGMCC 1062中的功能。【方法】以黑曲霉A. niger CGMCC 1062为出发菌株，通过农杆菌转化法将敲除spt7基因的质粒转入黑曲霉中；并分别将Δspt7菌株与对照组点种在CM培养基、不同碳源及含H2O2培养基上进行生长观察；通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)分析糖酵解关键基因、产孢相关基因的相对转录水平。【结果】成功获得spt7基因敲除菌株Δspt7；通过实验发现Δspt7菌株较对照菌株生长缓慢、菌落变白且产孢延迟；spt7基因的敲除显著影响菌株对不同碳源的利用；但Δspt7菌株同对照组均能在20 mmol/L H2O2的平板上正常生长。Δspt7菌株中糖酵解关键酶fbp、pfk、trk、pks、fda和gsdA基因的转录水平较对照组分别下调了2.65、4.46、6.05、4.90、3.20和3.20倍；产孢相关基因wetA、abaA和brlA的转录水平相较于对照组分别下调了529.93、172.40倍和9.61倍。【结论】spt7基因的缺失影响菌株的正常生长、菌落形态及分生孢子产生。

• 单位
  工业发酵微生物教育部重点实验室; 天津科技大学; 生物工程学院