pcDNA3.1(+)-CTGF真核表达质粒构建及其在人成骨样细胞SaOS-2细胞中的表达

作者：马科锋; 杨树广^*; 刘少君^*

来源：中国应用生理学杂志, 2019, 35(06): 573-590.

• 结缔组织生长因子(CTGF)
• 人成骨样细胞
• 质粒构建
• 真核表达
• 骨生成

目的:构建结缔组织生长因子(CTGF)的pc DNA3.1(+)真核表达质粒(pc DNA3.1(+)-CTGF),并检测其在人成骨样细胞Sa OS-2中的表达,为进一步研究CTGF基因在骨发育和骨修复中的机制提供技术支撑。方法:采用PCR方法体外克隆CTGF基因全序列,将其用同源重组技术连接到线性pc DNA3.1(+)载体上,构建pc DNA3.1(+)-CTGF真核表达质粒,并对该质粒进行测序鉴定;鉴定无误后转染至Sa OS-2细胞中,观察其48 h的表达情况。结果:基因测序证实pc DNA3.1(+)-CTGF真核表达重组质粒构建成功,与对照组相比,转染Sa OS-2细胞48 h后的CTGF表达水平显著上调,达到对照组的4.8×105倍(P<0.01)。结论:成功构建了pc DNA3.1(+)-CTGF真核表达质粒,并能在人成骨样细胞Sa OS-2中稳定表达,为深入研究CTGF基因对骨生成的调控机制奠定了基础。