miR-31调控人角膜缘干细胞自我更新和分化的机制研究

作者：刘志平; 沙翔垠; 曾敏智; 邹湖涌; 曾婧; 吴君舒

来源：广东医学, 2017, 38(08): 1164-1169.

DOI：10.13820/j.cnki.gdyx.2017.08.003

• 人角膜缘干细胞
• microRNAs
• 胚胎干细胞
• 微环境

目的探讨microRNA-31(miR-31)对在胚胎干细胞微环境中培养的角膜缘干细胞(LSCs)自我更新与分化的调控作用。方法采用CnT-20,添加20%胚胎干细胞培养上清液(ESC-CM),对LSCs进行培养。将ESC-CM组细胞进行转染miR-31或者Antago-31,检测细胞克隆形成能力的改变;流式细胞仪分析细胞周期、凋亡的改变,qPCR检测FIH-1、P21、P63、ABCG2、CK3、miR-31、miR-143、miR-145、miR-184的表达情况;免疫荧光与Western blot检测CK3、Cx43 P63、ABCG2、Survivin、FIH-1、P21、Caspase-3等的表达情况。结果 miR-31 mimic组细胞的CFE明显低于miR-31 inhibitor组[(3.00±1.00)%vs.(6.90±0.79%),P<0.05];Antago-31组细胞的CFE[(8.90±0.53)%vs.(7.27±0.80),P<0.05]则显著高于Ir-antago组。miR-31mimic组进入S期细胞的比例[(9.33±2.88)%vs.(16.00±1.73)%,P<0.05]明显低于miR-31 inhibitor组;Antago-31组进入S期细胞的比例[(22.33±2.58)%vs.(15.33±0.58)%,P<0.05]则显著高于Ir-antago组。miR-31mimic组细胞凋亡的比例[(31.13±7.56)%vs.(4.83±0.38%),P<0.05]明显高于miR-31 inhibitor组;Antago-31组细胞凋亡的比例[(3.03±0.23)%vs.(5.93±1.53%),P<0.05]则显著低于Ir-antago组。在进行miR-31mimc处理之后,P63、ABCG2、Survivin、FIH-1、miR-143、miR-145的表达量下降,而P21、Cx-43、CK3、miR-31、miR-184的表达量明显上升(P<0.05)。在antago-31处理组,P63、ABCG2、Survivin、FIH-1、miR-143、miR-145的表达量上升,而P21、Cx-43、CK3、miR-31、miR-184的表达量明显下降(P<0.05)。Caspase-3的表达水平在antago-31处理组一直维持在相对较低的水平。结论通过转染Antago-31提高了FIH-1在LSCs中的表达水平,并减少了P21的表达。miR-31表达水平的下调促进了LSCs干性的维持。ESC-CM通过抑制miR-31/FIH-1/P21部分调控了LSCs的更新与分化。

• 单位
  广州医科大学附属第二医院