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摘要
目的 研究脊髓康联合SRY转录盒因子2 (SOX-2)治疗脊髓损伤的作用机制。方法 成年SD大鼠随机分为空白组和给药组各5只。给药组大鼠以生药量20 g/（kg·d）脊髓康灌胃，空白组给予16 ml/（kg·d）生理盐水灌胃，均连续灌胃3天后腹主动脉采血制备含药血清和空白血清。体外培养1～4日龄大鼠幼仔皮层脑组织三代星形胶质细胞，分为空白血清组、SOX-2组、SOX-2+脊髓康血清组。SOX-2组加入10 mmol/L SOX-2;SOX-2+脊髓康血清组加入2.5%脊髓康含药血清和10 mmol/L SOX-2，使培养基中血清终浓度为10%；空白血清组加入10%空白血清。诱导培养21天后，光镜下观察3组神经元样细胞形态改变，细胞免疫荧光检测神经元轴突标志物微管相关蛋白2 (MAP2)的表达，Western-Blot检测细胞中下游代谢产物S腺苷甲硫氨酸（SAM）、乙酰辅酶A (acetyl-CoA)表达，PCR定量分析星形胶质细胞中糖酵解相关基因己糖激酶1(HK1)、己糖激酶2 (HK2)、磷酸果糖激酶1 (PFK1)、磷酸果糖激酶2 (PFK2)、M2型丙酮酸激酶同工酶（PKM2）基因表达。细胞能量代谢分析仪比较SOX-2组、SOX-2+脊髓康血清组细胞外酸化率（EACR）和耗氧率（OCR）。结果 光镜下见SOX-2+脊髓康血清组大量具有两极且长轴突的神经元样细胞，较SOX-2组明显增多；空白血清组见星形胶质细胞，未见神经元样细胞。与空白血清组和SOX-2组比较，SOX-2+脊髓康血清组MAP2、SAM、acetyl-CoA表达均升高，HK1、HK2、PFK1、PFK2、PKM2基因表达亦显著升高（P<0.05或P<0.01）。SOX-2+脊髓康血清组ECAR和OCR亦高于SOX-2组。空白血清组和SOX-2组MAP2、SAM、acetyl-CoA表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论 脊髓康含药血清联合SOX-2可以将星形胶质细胞重编程诱导为神经元细胞，其机制可能是通过提高糖酵解能力从而提升星形胶质细胞重编程。
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单位南京中医药大学; 无锡市中医医院
