产青霉素G酰化酶工程菌的构建

作者：邵威平; 吴卓颖; 张永玲; 杨富民; 田常庆

来源：甘肃农业大学学报, 2016, (01): 132-137.

DOI：10.13432/j.cnki.jgsau.2016.01.023

• 青霉素G酰化酶
• PCR
• 重组表达
• 基因工程菌 penicillin G acylase
• PCR
• recombinant expression
• gene engineering bacteria

【目的】构建表达巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶(PGA)的枯草芽孢杆菌工程菌.【方法】首先采用PCR从巨大芽孢杆菌基因组DNA中扩增出长度为2 409bp的PGA编码基因,经琼脂糖凝胶电泳检测及DNA测序验证后,再将其与枯草芽孢杆菌穿梭表达载体PMA5(7.5kb)连接后导入到枯草芽孢杆菌10397中表达,并通过聚丙烯酰胺琼脂糖凝胶电泳(SDS-PAGE)检验其能否表达.【结果】构建了9.9kb大小的PMA5-PGA重组质粒,经SDS-PAGE验证,青霉素酶基因在枯草芽孢杆菌10 397中作出表达.基因工程菌在37℃、220r/min培养36h发酵条件下,所产PGA的酶活可达到12.426U/mL...

• 单位
  食品科学与工程学院; 生命科学技术学院; 甘肃农业大学; 临夏州人民医院