基于重组酶介导等温扩增技术的鸡滑液囊支原体检测方法建立和初步应用

作者：卞红春; 余树培; 杨凌; 陈静华; 陈丽珠; 程珂; 尹彦; 夏文龙^*

来源：中国家禽, 2022, 44(07): 37-42.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2022.07.007

• 鸡滑液囊支原体
• 重组酶介导等温扩增
• 检测

为建立一种鸡滑液囊支原体(MS)快速简便的检测方法,研究根据MS vlhA基因保守序列设计3对引物,通过引物筛选和条件优化,建立了基于重组酶介导等温扩增技术(RAA)的MS检测方法,并对其特异性和灵敏度进行评估。应用该方法对68份鸡咽喉拭子临床样品进行检测,并和农业行业标准中的PCR方法进行对比。结果显示:该方法最佳引物为vlhA F3/vlhA R3,在38℃孵育25 min即可完成靶基因扩增,并且特异性强,与鸡毒支原体(MG)、禽多杀性巴氏杆菌、鸡沙门菌、鸡大肠杆菌、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒(AIBV)、鸡传染性法氏囊病病毒等其他鸡病病原体无交叉反应;灵敏度高,对MS基因组DNA的最低检出限度为15.5 pg;应用该方法从68份临床样品中检出阳性样品29份,与PCR方法检测结果一致。研究表明,建立的RAA方法快速简便,不依赖昂贵的仪器设备,有望用于基层实验室或MS的临床快速诊断。

• 单位
  生物工程学院; 盐城师范学院