科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨microRNA-1469(miR-1469)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法选取2010年1月至2012年12月于西安交通大学第一附属医院手术切除的HCC组织和对应的癌旁组织(距肿瘤边缘> 2 cm)标本各76例,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HCC组织及癌旁组织中miR-1469的表达水平,分析miR-1469表达与HCC临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存曲线分析miR-1469表达与HCC患者3 a总体生存率的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HCC细胞系Hep G2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402及正常肝细胞系LO2中miR-1469的表达水平;培养Hep3B和SMMC-7721细胞,当细胞融合度达到70%时,分别应用miR-1469mimics和相应的阴性对照脂质体转染Hep3B细胞,应用miR-1469 inhibitors和相应的阴性对照脂质体转染SMMC-7721细胞。转染48 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中miR-1469的表达水平,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和平板克隆形成实验观察miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞增殖及克隆形成能力的影响,流式细胞术检测miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞周期的影响,Transwell实验观察miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞侵袭及迁移能力的影响,Western blot法检测Hep3B和SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白表达。结果 miR-1469在HCC组织和癌旁组织中的相对表达量分别为0. 71±0. 03、5. 49±0. 04,HCC组织中miR-1469相对表达量显著低于癌旁组织(P <0. 05)。miR-1469表达与肿瘤直径、肿瘤数目、TNM分期、组织分化程度及微血管侵犯相关(P <0. 05),而与患者的年龄、性别、血清甲胎蛋白水平、静脉侵犯、Edmondson病理分级、肿瘤部位无相关性(P> 0. 05)。KaplanMeier生存分析显示,miR-1469高表达HCC患者的3 a总体生存率显著高于低表达者(P <0. 05)。miR-1469在LO2、Hep G2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402细胞中的相对表达量分别为1. 01±0. 02、0. 45±0. 01、0. 05±0. 01、0. 61±0. 02、0. 14±0. 01、0. 29±0. 02; miR-1469在Hep G2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402细胞中的相对表达量显著低于LO2细胞(P <0. 05);其中Hep3B细胞中miR-1469表达量最低,SMMC-7721细胞中miR-1469表达量最高。miR-1469mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞中miR-1469相对表达量分别为4. 47±0. 15、0. 05±0. 01,miR-1469mimics组Hep3B细胞中miR-1469相对表达量显著高于miR-1469 control mimics组(P <0. 05)。miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞中miR-1469相对表达量分别为0. 20±0. 11、1. 00±0. 00,miR-1469inhibitors组SMMC-7721细胞中miR-1469相对表达量显著低于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。MTT结果显示,培养24、48、72 h时,miR-1469 mimics组Hep3B细胞增殖能力显著低于miR-1469 control mimics组,miR-1469inhibitors组SMMC-7721细胞增殖能力显著高于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。平板克隆实验结果显示,miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞的克隆数分别为17. 00±1. 73、65. 67±2. 33,miR-1469mimics组Hep3B细胞的克隆形成能力显著低于miR-1469 control mimics组(P <0. 05); miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞的克隆数分别为93. 00±2. 08、27. 67±1. 45,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞的克隆形成能力显著高于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。流式细胞术结果显示,与miR-1469control mimics组比较,miR-1469 mimics组G1期Hep3B细胞显著增多,S期Hep3B细胞显著减少(P <0. 05),但2组G2期细胞比例比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。与miR-1469 control inhibitors组比较,miR-1469 inhibitors组G1期SMMC-7721细胞显著减少,S期SMMC-7721细胞显著增多(P <0. 05);但2组G2期SMMC-7721细胞比例比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。Transwell实验结果显示,miR-1469 mimics组Hep3B细胞迁移数和侵袭数分别为59. 00±2. 08、29. 00±2. 08,miR-1469 control mimics组Hep3B细胞迁移数和侵袭数分别为35. 00±1. 53、20. 33±1. 45; miR-1469 mimics组Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显著高于miR-1469 control mimics组(P <0. 05)。miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞迁移数和侵袭数分别为26. 00±1. 16、17. 33±0. 88,miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞迁移数和侵袭数分别为56. 33±3. 18、44. 67±1. 45; miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞的迁移和侵袭能力显著低于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。Western blot结果显示,miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞中NDRG1蛋白相对表达量分别为0. 23±0. 04、1. 00±0. 00,miR-1469 mimics组Hep3B细胞中NDRG1蛋白相对表达量显著低于miR-1469 control mimics组(P <0. 05); miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白相对表达量分别为3. 90±0. 17、1. 00±0. 00,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白相对表达量显著高于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。结论 MiR-1469在HCC中表达下调,且其表达与肿瘤数目、肿瘤直径、TNM分期、组织分化程度、微血管侵犯及患者预后密切相关; miR-1469可能通过靶向结合NDRG1并抑制其表达而抑制HCC细胞的增殖、周期、侵袭和迁移。
-
单位西安交通大学第一附属医院
