miR-508-5P慢病毒过表达载体的构建及对S期激酶相关蛋白2靶向调控作用

作者：白静; 邢译文; 范维宁; 郭乐; 刘鑫; 郑锡铭; 徐广贤

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2014, 30(01): 28-32.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008303

• microRNA
• miR-508-5P
• S期激酶相关蛋白2

目的构建miR-508-5p慢病毒过表达载体,探讨其对SKP2基因的靶向调控作用。方法基于化学法合成miR-508-5p茎环结构RNA,将其克隆入线性化的pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定,将阳性重组体转染至HEK293T细胞;同时构建与miR-508-5p互补靶基因SKP2的3’非翻译区(3’UTR),将其克隆入线性化的pMIR-Report载体中。通过相对荧光素酶活性、Western blot法及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法验证miR-508-5p与SKP2 3’UTR的靶向调控关系。结果经PCR、酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-508-5p及pMIR-Report-SKP2-3’UTR重组质粒,并通过实验证实miR-508-5p过表达明显抑制SKP2的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05);抑制miR-508-5p的表达,则明显上调SKP2的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05)。结论成功构建pSicoR-miR-508-5p慢病毒过表达载体,证实通过靶向作用于SKP2-3’UTR的特异序列直接抑制SKP2基因的表达。

• 单位
  宁夏医科大学总医院; 宁夏医科大学