利用CRISPR/Cas9系统构建猪PLIN1基因敲除载体及其效率检测

作者：彭玥晗; 徐磊; 许金蔓; 王昊; 胡悦旻; 鞠辉明^*

来源：中国兽医杂志, 2021, 57(04): 1-137.

• 猪
• PLIN1
• CRISPR/Cas9
• 基因突变

围脂滴蛋白(PLIN1)是具有抑制基础脂解,调节脂肪甘油三酯的储存和水解的蛋白。本试验利用CRISPR/Cas9系统设计了3条能够靶向切割PLIN1基因的sgRNA并构建相应的突变载体。将构建好的质粒转染入PK15细胞,利用嘌呤霉素筛选,富集PLIN1突变细胞,提取各组细胞DNA进行PCR扩增突变区域,通过序列测定在DNA水平确定突变效率。提取各组细胞总RNA及蛋白,分别利用qRT-PCR及Western Blot测定PLIN1 RNA水平和蛋白水平的表达量。结果表明,各组细胞PLIN1 DNA均检测到突变或缺失,PLIN1-KO1、PLIN1-KO2和PLIN1-KO3突变比率分别为8%、30%和18%,且mRNA及蛋白表达量均有下降,其中PLIN1-KO2突变效率最高,RNA和蛋白表达量与正常组细胞相比分别下降78.26%和74.00%,差异均极显著(P<0.01)。本试验成功构建了PLIN1基因敲除载体,其中PLIN1-KO2载体突变效率最高,为后续研究PLIN1基因对猪肌肉发育、能量代谢及线粒体功能等方面的作用提供科学依据。

• 单位
  江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 扬州大学