羊布鲁氏菌病胶体金抗体检测方法的建立

作者：王海丽; 董炳梅; 李芬; 许崇友; 王金良^*

来源：中国兽医杂志, 2020, 56(12): 24-126.

• 布鲁氏菌
• 胶体金
• 免疫层析试纸条

为了建立羊布鲁氏菌胶体金检测方法,本试验在对猪种布鲁氏菌S2株外膜蛋白OMP25表达纯化的基础上,对金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)进行胶体金标记,并喷涂于玻璃纤维上,制备布鲁氏菌抗体检测胶体金免疫层析试纸条。结果表明,SPA蛋白标记胶体金溶液的pH为5.6;金标垫上SPA标记物的浓度为7.8μg/mL;检测线包被条件为OMP25蛋白的浓度为1.20 mg/mL,点膜仪参数为Speed 40 mm/sec, 1.0μL/cm;质控线包被条件为羊IgG的浓度为1.60 mg/mL,点膜仪参数为Speed 40 mm/sec, 1.0μL/cm;待检血清样品的稀释倍数为20倍;特异性试验表明,该试纸条对羊布鲁氏菌病阳性血清具有高度特异性,与大肠杆菌等阳性血清无交叉反应;灵敏度检测结果与ELISA相当;试纸条在4℃保存9个月,室温6个月,其敏感性和特异性不发生改变;对临床采集的320份血清样品进行检测,结果与ELISA试剂盒符合率为95.9%,敏感性为95.8%,特异性为97.0%。表明本试验建立的布鲁氏菌病抗体免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合于羊布鲁氏菌病抗体的现场检测。

• 单位
  聊城职业技术学院; 山东省滨州畜牧兽医研究院