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摘要
目的 比较腺相关病毒(AAV)不同血清型对小鼠视网膜层的趋向性。方法 构建pFastBacDual-inCap衣壳质粒和pFastBacDual-ITR-CMV-EGFP基因组质粒；包装重组腺相关病毒2型(rAAV2)、rAAV6、rAAV8、rAAV9；以感染复数(MOI)2000的比例感染HEK293T细胞,24 h后观察荧光表达；应用随机数字表法将C57BL/6小鼠分为rAAV2、rAAV6、rAAV8、rAAV9组和对照组,每组5只,分别双眼玻璃体腔注射rAAV2、rAAV6、rAAV8、rAAV9和磷酸盐缓冲液(PBS)各1 μl,注射后2周,制作眼球冰冻切片以及视网膜铺片,分别应用倒置荧光显微镜和激光扫描共焦显微镜观察rAAV不同血清型增强型绿色荧光蛋白(EGFP)荧光强度和感染部位。应用倒置荧光显微镜观察玻璃体腔注射rAAV2后2周、1个月、3个月EGFP荧光强度变化。结果 重组病毒对HEK293T的感染效率从高到低依次为rAAV2、rAAV6、rAAV8和rAAV9,转导效率分别为39.5%、18.4%、8.7%和4.6%；在小鼠视网膜中,rAAV2和rAAV6在神经节细胞表达水平较高,rAAV8和rAAV9在视网膜色素上皮(RPE)和光感受器细胞中表达水平较高；rAAV2介导EGFP可于注射后2周、1个月、3个月内在视网膜稳定表达。结论 rAAV不同血清型对视网膜RPE细胞和神经节细胞具有高趋向性和高效表达,rAAV2玻璃体腔注射后转导效率较高,且在注射后3个月内稳定表达。
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