重组人肝细胞生长因子-NK4腺病毒的制备及初步鉴定

作者：石慧; 陈德基; 刘启才

来源：现代临床医学生物工程学杂志, 2006, (04): 358-361.

• 复制缺陷型腺病毒
• 同源重组
• NK4基因
• 基因治疗 Replication deficient adenovirus
• Homologous recombination
• NK4 gene
• Gene therapy

目的制备表达人肝细胞生长因子(HGF)-NK4蛋白的复制缺陷型重组腺病毒。方法酶切pcDNA3-hNK4质粒获得NK4基因编码区序列并克隆至穿梭载体构建重组pAdTrack-CMV-NK4载体,线性化后与pAdEasy-1共转化B J5183,通过同源重组得到重组pAd-NK4病毒载体。将重组腺病毒载体转染HEK293包装细胞制备重组腺病毒,用病毒悬液感染人肝癌细胞株HepG2。RT-PCR法检测感染肿瘤细胞中NK4 mRNA表达。结果酶切鉴定得到阳性pAd-NK4重组腺病毒载体,该载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装。在转染2 d后能观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达。制备的Ad-...

• 单位
  广州医科大学