抗鸡源EphA2蛋白小鼠多克隆抗体的制备及其特性研究

作者：姚晓慧; 李拓凡; 谢泉; 万志敏; 邵红霞; 秦爱建; 叶建强^*

来源：中国家禽, 2020, 42(03): 29-34.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2020.03.006

• 鸡源EphA2
• 原核分段克隆表达
• 真核表达
• 多克隆抗体
• 反应性

为深入探究鸡源EphA2生物学功能,试验首先对鸡源EphA2基因进行了原核分段克隆以及真核表达载体构建。重组原核表达载体分别命名为pGEX-6p-1-EphA2-A(1-534aa)和pGEX-6p-1-EphA2-B(585-972aa),真核表达载体命名为pcDNA3.1-EphA2。重组原核表达载体转化BL21后经IPTG诱导以及SDS-PAGE分析发现,融合蛋白GST-EphA2-A和GST-EphA2-B均获得有效表达。以纯化的GST-EphA2-A和GST-EphA2-B蛋白免疫小鼠制备了抗鸡EphA2多克隆抗体。间接免疫荧光试验以及Western blot试验表明,所制备的抗鸡EphA2多克隆抗体不仅能识别转染pcDNA3.1-EphA2的DF-1及LMH细胞中表达的外源性EphA2,而且还能有效识别内源性鸡源EphA2蛋白。本研究中鸡EphA2的成功表达及其多克隆抗体研制为后续研究鸡EphA2的功能提供了分子生物学工具。

• 单位
  扬州大学