基于PI3K/AKT信号通路探究活血通络法对硝普钠诱导的关节软骨细胞凋亡的分子作用机制

作者：廖建青; 马富文; 冯晋; 谢邦; 吕静; 韦佳佳; 王琦

来源：四川中医, 2021, 39(09): 33-38.

• 膝关节骨性关节炎
• 原代软骨细胞
• 活血通络法
• 骨痹合剂PI3K/AKT信号传导通路

目的:基于PI3K/AKT信号通路探究具有活血通络作用的骨痹合剂对硝普钠诱导的软骨细胞凋亡模型可能的分子作用机制。方法:体外培养小鼠软骨传代细胞,建立硝普钠诱导的细胞凋亡模型。细胞传代成功后,根据分组分别加入5%、10%、20%浓度的骨痹合剂、氨糖美辛、生理盐水含药血清。采用MTT检测细胞存活和生长情况,运用流式细胞仪(Flow Cytometry, FCM)、PCR仪、蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测在硝普钠诱导干预下3组含药血清的小鼠膝关节软骨细胞相关蛋白水平的表达。结果:(1)对照组软骨细胞形态饱满,整体呈现梭形;而硝普钠组细胞变细、变长,细胞状态变差,细胞凋亡比例增加;(2)相对于正常对照组的软骨细胞,硝普钠处理的软骨细胞Bad、Caspase-3、Caspase-9、NF-κB表达明显上调(P<0.01),而骨痹合剂组和氨糖美辛组细胞内的Bad、Caspase-3、Caspase-9、NF-κB蛋白的表达被抑制(P<0.01)。(3)与正常对照组比较,硝普钠组PI3K/AKT和mTOR蛋白表达量均上升,与硝普纳诱导的生理盐水组比较,硝普纳诱导的骨痹合剂组PI3K/AKT和mTOR蛋白的表达量均下降。结论:(1)硝普纳对细胞具有损伤作用,能促进和诱导软骨细胞凋亡;(2)具有活血通络作用的骨痹合剂能通过调控PI3K/AKT信号通路,抑制NF-κB、Bad、caspase3、caspase9蛋白的表达,从而减少硝普纳诱导的软骨细胞凋亡。

• 单位
  云南省中医医院; 云南中医药大学