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摘要
目的构建PML-RARα融合基因相关重组表达质粒,在大肠埃希菌中表达可溶性蛋白并进行纯化。方法利用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）以PML-RARα全长质粒为模板分别扩增出长度均为1 200 bp的PML和RARα序列,并将它们分别插入PET32a（+）质粒中,构建重组表达质粒,化学法转化大肠埃希菌DH5α进行克隆,菌落PCR筛选阳性转化子,双酶切和测序鉴定重组质粒的正确性。正确重组的表达质粒分别命名为PML-Flag-PET32a（+）和Flag-RARα-PET32a（+）。将正确重组的表达质粒转化感受态大肠埃希菌BL21（DE3）,经异丙基β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达,利用表达蛋白的组氨酸"标签"（His-tag）进行Ni2+-树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化蛋白质。结果 PCR扩增获得目的基因,重组表达质粒经EcoRI/HindIII双酶切和测序鉴定证明构建正确。转化感受态BL21（DE3）并经诱导后得到高效表达,SDS-PAGE和Western blotting显示纯化蛋白为目的蛋白。结论成功构建重组表达质粒,并经诱导表达后可纯化出目的蛋白,为进一步的抗体制备等实验奠定了基础。
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单位川北医学院; 川北医学院附属医院
