DEC2通过阻断TGF-β/ROCK1信号通路抑制小鼠肾小球内皮细胞转分化和肾纤维化

作者：尹秀花^*; 陈莉; 孟繁伟; 姜鹰

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2023, 39(09): 816-823.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009636

• 分化型胚胎软骨发育基因2(DEC2)
• 肾小球内皮细胞
• Rho相关激酶1(ROCK1)
• 上皮肌纤维母细胞转分化
• 肾纤维化

目的 基于分化型胚胎软骨发育基因2(DEC2)通过转化生长因子β/Rho相关激酶1(TGF-β/ROCK1)信号通路探讨对肾小球内皮细胞转分化的保护机制。方法 将小鼠随机分为假手术组、单侧输尿管梗阻(UUO)组、空载体处理的UUO组和过表达DEC2的UUO组，每组6只。除假手术组外，其余组建立UUO模型。空载体处理的UUO组和过表达DEC2的UUO组，于第0天(UUO后立即)在超声系统的引导下每侧肾脏注射10μL(108个嗜菌斑形成单位[PFU])空载体或DEC2载体。术后14 d处死小鼠，HE染色检测肾组织学病变情况、 Masson染色检测肾纤维化情况，Western blot法检测肾组织DEC2、 α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、 Rho相关激酶1(ROCK1)的蛋白表达。正常人肾小球内皮细胞(GEnC),采用ROCK1抑制剂Y-27632处理或转染DEC2, Western blot法检测暴露于TGF-β的GEnC中ROCK1、 α-SMA、 DEC2、 E-cadherin表达影响。通过免疫荧光细胞化学染色检测GEnC中ROCK1和DEC2定位，并通过免疫共沉淀实验验证二者的相互作用关系。结果 与假手术组相比，UUO组在第14天出现显著的肾纤维化和胶原蛋白积聚。在UUO组中，小鼠肾组织中DEC2和E-cadherin的表达显著降低，α-SMA的表达显著增加。与空载体处理的UUO组相比，过表达DEC2的UUO组小鼠肾纤维化和胶原蛋白积聚程度降低，并且小鼠肾组织中ROCK1、 α-SMA表达降低和DEC2、 E-cadherin表达增加。TGF-β以时间依赖性方式增强GEnC中ROCK1和α-SMA表达，并且DEC2、 E-cadherin水平降低。用ROCK1抑制剂Y-27632处理可部分消除TGF-β诱导的ROCK1、 α-SMA表达增加和DEC2、 E-cadherin表达降低。此外，在TGF-β刺激前，将GEnC转染DEC2降低细胞中ROCK1、 α-SMA表达，并增加DEC2、 E-cadherin表达。免疫荧光染色显示DEC2在GEnC中与ROCK1共定位，并且免疫共沉淀结果显示DEC2与ROCK1相互拉低。结论 DEC2在纤维化肾组织中下调，上调DEC2通过阻断TGF-β/ROCK1信号通路抑制GEnC的上皮肌纤维母细胞转分化及肾纤维化。

• 单位
  山东中医药高等专科学校