大鼠β-catenin miRNA表达载体的构建及在脂肪干细胞中沉默效果的检测

作者：黄海森; 刘爽; 于湄; 罗小昕; 郭维华; 田卫东

来源：四川大学学报（医学版）, 2014, 45(05): 749-753.

DOI：10.13464/j.scuxbyxb.2014.05.004

• 脂肪干细胞
• β-catenin
• miRNA
• 表达载体

目的构建具有沉默大鼠脂肪干细胞β-catenin表达的miRNA(miR)表达载体。方法通过酶切法将合成的miR表达载体寡聚核苷酸引物与质粒pSWH相连,形成pSWH-miR;PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EGFP)开放阅读框,插入经双酶切处理的pSWH-miR形成pSWH-EGFP-miR。β-catenin miR表达质粒瞬时转染SD大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells derived from rats,rADSCs),72h后提取细胞全蛋白,Western blot检测β-catenin的表达情况。结果针对大鼠β-catenin的不同位点,一共构建了5个miRNA表达载体(miR-780、miR-796、miR-1467、miR-1948、miR-1960),其中miR-780、miR-796对β-catenin沉默效果最好(P<0.05),miR-1960的沉默效果次之(P<0.05),miR-1467、miR-1948不具有沉默效果(P<0.05)。结论 miR-780、miR-796能够有效沉默SD大鼠脂肪干细胞中β-catenin的表达。

• 单位
  口腔疾病研究国家重点实验室; 四川大学; 四川大学华西口腔医院; 生命科学学院