快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的赖解旋酶恒温基因扩增方法的建立

作者：刘东; 张捷; 朱华东; 周巍^*; 张岩^*

来源：乳业科学与技术, 2020, 43(03): 12-16.

DOI：10.15922/j.cnki.jdst.2020.03.003

• 赖解旋酶恒温基因扩增法
• 发酵乳
• 葡萄糖杆菌
• 检测

建立赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的方法。选择葡萄糖杆菌ITS基因序列(基因号为KF896260.1)为目的基因,设计特异性引物,并优化反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的添加量,建立最优反应体系。采用建立的HDA体系对多种菌株进行扩增和电泳检测,验证方法特异性,通过HDA法直接检测发酵乳中的葡萄糖杆菌,并确定其检出限。结果表明:采用HDA法检测发酵乳中葡萄糖杆菌,反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的适宜添加量分别为0.10 μg和5.0 μg,扩增产物与设计序列长度(309 bp)一致,特异性良好,检出限为4.3×101 CFU/g。该方法用于检测发酵乳中葡萄糖杆菌的灵敏度高、耗时短。

• 单位
  河北省食品检验研究院