胎鼠神经干细胞原代培养及传代条件优化

作者：朱文豪; 刘天一; 何川; 张晓宇; 辛强; 王海峰^*

来源：吉林大学学报(医学版), 2023, 49(06): 1642-1648.

DOI：10.13481/j.1671-587X.20230632

• 神经干细胞
• 胎鼠
• 原代培养
• 传代条件
• 神经球

目的：探讨胎鼠神经干细胞(NSCs)原代培养方法和活性评价体系，确定NSCs的最佳传代条件。方法：选取孕11～14 d SD大鼠，提取胎鼠原代NSCs，采用巢蛋白免疫荧光染色鉴定NSCs。将NSCs以1.0×104、2.0×104、6.0×104、1.0×105、1.6×105和2.0×105 m L-1的细胞密度进行传代培养48 h后观察神经球的形态表现，测定神经球直径。活死细胞染色法检测不同直径神经球中NSCs存活率。结果：NSCs呈巢蛋白阳性，培养的细胞为神经干细胞。NSCs呈聚集生长和牢固细胞间黏附聚集模式，形成神经球，平均直径为(152.72±47.52)μm，球与球之间少有单独的细胞散在。与2.0×104 m L-1传代密度比较，6.0×104 m L-1和1.0×105 m L-1传代密度的神经球直径增大(P<0.05)。1.0×105 m L-1、1.6×105 m L-1和2.0×105 m L-1传代密度的神经球直径比较差异无统计学意义(P>0.05)。与0～40μm、40～60μm、60～80μm和80～100μm直径神经球比较，100～200μm直径神经球中NSCs存活率降低(P<0.05)。结论：以1.0×105 m L-1的密度进行传代时神经球直径为80～100μm，可有效提高NSCs传代培养效率和活性。

• 单位
  吉林大学第一医院