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摘要
脱水响应元件结合蛋白2(dehydration responsive element binding protein 2, DREB2)是一种转录因子，在模式植物应答干旱、高盐和热激胁迫中起调控作用。然而在适应喀斯特干热石山环境的文采报春苣苔（Primulina wentsaii）中，这些基因的功能尚不清楚。筛选对干热双重胁迫联合响应的文采报春苣苔DREB2同源基因，可为苦苣苔抗逆种质的创制提供新的基因储备。该研究首先根据文采报春苣苔转录组的序列信息设计特异引物，以g DNA和cDNA为模板分离PwDREB2s基因，然后通过生物信息学方法，对氨基酸序列、系统进化关系及保守基序进行分析，再使用半定量RT-PCR(sqRT-PCR)分析Pw DREB2s基因在低温、热激、模拟干旱（渗透）、高盐、外源ABA及氧化等单一胁迫下的表达模式，最后选择能同时应答模拟干旱与热激的成员，利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其在单一和复合干热处理中的转录本水平。结果表明：（1）分离获得了8条缺少内含子的Pw DREB2s基因，能分别编码198～386个氨基酸，拥有AP2/ERF结构域、核定位信号或转录激活域等典型特征序列；（2）PwDREB2A/2AL1/2AL2、PwDREB2D/2DL和PwDREB2F转录因子被分别归入A-2亚组的亚型1、亚型2和亚型3,PwDREB2EL1/2EL2转录因子则被归入A-6亚组；（3） SqRT-PCR分析表明Pw DREB2s基因表达受多种单一胁迫的诱导，其中Pw DREB2A/2AL1/2AL2/2D基因能同时应答模拟干旱与热激胁迫；（4）QRT-PCR结果揭示了在液体培养条件下，Pw DREB2D基因对干热处理的应答具有组织特异性，仅在根状茎中能被强烈诱导。在土壤栽培条件下，与对照相比时，除Pw DREB2D基因以外，Pw DREB2A/2AL1/2AL2基因在自然干旱-热激组合胁迫中的转录反应显著增强。与单一的自然干旱和高温处理相比时，Pw DREB2AL1/2AL2基因在自然干旱-热激组合胁迫中的表达水平显著较高。由此可见，Pw DREB2AL1/2AL2基因在文采报春苣苔干热复合胁迫应答中可能发挥了重要的调控作用。
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