基于放线菌素D的甲状腺癌细胞系凋亡模型构建

作者：肖林; 曹师瑜; 李怡洁; 申梦佳; 张培川; 曹婷; 叶丰^*

来源：生物技术, 2022, 32(03): 309-320.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2022.03.0049

• 甲状腺癌
• 细胞凋亡
• 放线菌素D
• 流式细胞术

[目的]建立甲状腺细胞系细胞凋亡诱导模型。[方法]用0～64 mg/mL放线菌素D(Actinomycin D,ACT D)分别处理三种甲状腺细胞(Nthy-ori 3-1、TPC-1、BCPAP)24 h, CCK8测定ACT D对三种甲状腺细胞系的半数抑制浓度(IC50)。选择半数抑制浓度分别作用于这三种细胞24 h,采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率，采用蛋白免疫印迹(Western Blot, WB)方法检测凋亡相关蛋白表达情况。[结果]不同浓度ACT D处理24 h后，Nthy-ori 3-1、TPC-1、BCPAP细胞活力均降低(P<0.05),其中ACT D对三种细胞的24 h处理IC50分别为为64、32、64 mg/mL。采用相对应的IC50药物浓度分别处理上述细胞后，流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法结果表明三种细胞系的凋亡率相较于对照组有明显差异(P<0.05);BCPAP细胞系：对照组和实验组凋亡率分别为7.40%±0.20%和28.8%±1.50%;Nthy-ori 3-1:对照组和实验组凋亡率分别为1.99%±0.08%和5.47%±0.57%;TPC-1:对照组和实验组凋亡率分别为1.50%±0.10%和10.50%±0.40%。WB检测凋亡指标(BAX,cleaved-Caspase3, cleaved-Caspase8)结果显示，三种甲状腺细胞系BCL-2表达均降低，BAX、cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase8表达均增高。[结论] ACT D可有效诱导3种甲状腺细胞系凋亡。

• 单位
  四川大学华西医院