微小RNA-375通过靶向PAX6对宫颈癌HeLa细胞顺铂敏感性的影响

作者：蒋莉莎; 陆义红; 水丽君; 邓敏^*

来源：临床肿瘤学杂志, 2018, 23(06): 501-507.

• 宫颈癌
• 微小RNA-375
• 增殖
• 顺铂耐药
• 人类配对盒基因6

目的探讨微小RNA-375(miR-375)和人类配对盒基因6(PAX6)在宫颈癌顺铂耐药株HeLa cisR中的表达及耐药逆转作用并初步探讨可能机制。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测28例正常宫颈组织、30例宫颈癌组织(14例顺铂敏感和16例顺铂不敏感)和不同顺铂敏感性细胞HeLa、HeLa cisR中miR-375、PAX6 mRNA水平,采用脂质体法向HeLa和HeLa cisR细胞转染含miR-375模拟物(mimics)的寡核苷酸探针(过表达组)和阴性对照NC(阴性对照组),以不行任何转染的为空白对照组。采用QPCR检测转染后HeLa和HeLa cisR细胞中miR-375和PAX6 mRNA水平,采用MTT法检测不同浓度顺铂(1、3、10、30、100μmol/L)处理后的增殖情况并计算半数抑制浓度(IC50)以评价顺铂敏感性,Western blotting检测PAX6蛋白水平,双荧光素酶报告基因试验评价miR-375对PAX6的靶向调控作用。结果宫颈癌组织中的miR-375水平低于正常宫颈组织(0.714±0.341 vs.1.006±0.299),PAX6 mRNA水平高于正常宫颈组织(1.855±0.928 vs.1.011±0.257),miR-375水平与PAX6 mRNA水平呈负相关(r=-0.416,P<0.05)。与化疗敏感组相比,化疗不敏感组的miR-375水平降低,而PAX6 mRNA水平升高(P<0.05)。HeLa cisR细胞的miR-375水平低于HeLa细胞(0.365±0.098 vs.1.032±0.135),而PAX6 mRNA水平高于HeLa细胞(3.154±0.957 vs.1.067±0.168),差异均有统计学意义(P<0.05)。与其余两组相比,过表达组转染后的miR-375水平升高,PAX6蛋白和mRNA水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-375过表达可降低顺铂IC50(P<0.05),先转染miR-375 mimics 24 h后再转染过表达PAX6的pCMV-PAX6质粒后细胞的IC50与未转染细胞的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-375通过靶向PAX6参与了宫颈癌细胞的顺铂耐药,miR-375有望成为逆转宫颈癌顺铂耐药的靶点。

• 单位
  安徽医科大学第二附属医院