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摘要
目的:探究冠通方含药血清通过microRNA-223(miR-223)/NOD样受体家族3(NLRP3)信号通路调控血管内皮细胞焦亡的作用及机制研究。方法:将血管内皮细胞系人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)分为对照组、模型组、空白血清组和含药血清组。对照组仅进行常规培养，其余3组采用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导HUVECs细胞损伤模型，模型组不进行任何干预，空白血清组采用空白血清干预，含药血清组则采用冠通方含药血清进行干预。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-223 mRNA表达，蛋白质印迹法(Western Blot)检测NLRP3、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase1)的蛋白表达，酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)的含量，细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞活性，并计算乳酸脱氢酶(LDH)释放水平。碘化丙啶(PI)染色荧光显微镜下观察细胞膜完整性和细胞焦亡情况。结果:与对照组相比，模型组HUVECs细胞活力明显降低(P<0.05);与模型组相比，空白血清组细胞活力差异无统计学意义(P>0.05),含药血清组的细胞活力则明显增强(P<0.05)。与对照组相比，模型组LDH释放水平明显升高(P<0.05);与模型组相比，空白血清组LDH释放水平差异无统计学意义(P>0.05),含药血清组LDH释放水平则明显下降(P<0.05)。与对照组相比，模型组PI染色程度明显增加；与模型组相比，空白血清组PI染色程度变化不明显，含药血清组PI染色程度明显减少。与对照组相比，模型组炎性因子IL-1β、IL-18含量明显升高(P<0.05);与模型组相比，空白血清组IL-1β、IL-18含量差异无统计学意义(P>0.05),含药血清组IL-1β、IL-18含量明显下降(P<0.05)。与对照组相比，模型组Caspase1蛋白表达明显上调；与模型组相比，空白血清组Caspase1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),含药血清组Caspase1蛋白表达明显下调。与空白血清组相比，含药血清组HUVECs细胞内miR-223的表达明显上调(P<0.05),NLRP3的表达明显下调(P<0.05)。结论:冠通方含药血清通过上调miR-223下调NLRP3,抑制炎性因子IL-1β、IL-18水平，抑制Caspase1诱导的血管内皮细胞焦亡，提示冠通方对于冠心病病人的血管内皮细胞具有较好的保护作用。
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单位广西中医药大学; 广西中医药大学附属瑞康医院
