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摘要
为了探究LEPR基因在两栖类的生物学功能，利用嗜水气单胞菌感染东北林蛙建立炎症模型，分析LEPR基因在细菌感染后的表达情况。首先利用RT-PCR技术克隆LEPR基因并进行生物信息学分析，再构建Ah感染的东北林蛙炎症模型；通过苏木精-伊红染色法(HE染色)观察感染后组织病理变化，并利用qRT-PCR技术分析生理状态和感染状态LEPR基因的组织表达规律差异，最后结合免疫组织化学染色对肾脏、皮肤和肌肉等组织中LEPR蛋白表达变化进行检测。结果显示，获得东北林蛙LEPR基因序列长度为3 604 bp,其开放读码框为3 405 bp,共编码1 134个氨基酸；亚细胞定位显示，LEPR蛋白质为具有一次跨膜结构域的膜蛋白；同源性分析证实东北林蛙与两栖类同源性在52.6%以上，表明LEPR的保守程度较低；基于qRT-PCR结果显示，LEPR mRNA在健康东北林蛙心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、皮肤、肌肉和胃等8种组织中均有表达，在皮肤组织中的相对表达量显著高于其他组织；Ah感染后LEPR基因在不同组织中显著上调，但应答时间和水平有所差异；免疫组织化学结果表明，肾脏、皮肤和肌肉LEPR蛋白表达量变化趋势与qRT-PCR结果基本一致。皮肤组织中LEPR基因应答强烈，也说明其可能参与感染过程，为进一步扩展两栖类LEPR基因的免疫学功能研究奠定了基础。
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