A型塞内卡病毒的分离与鉴定

作者：郑敏; 杨帆; 曹伟军; 张伟; 唐丽杰^*; 郑海学^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(10): 1281-1287.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0181

• A型塞内卡病毒
• 分离鉴定
• 遗传进化分析

为了确定2020年河南某猪场水疱性疾病的病因，通过提取发病猪的水疱皮样品的RNA，用RT-PCR方法初步检测，经BHK-21细胞分离培养病毒，进一步用间接免疫荧光试验(IFA)鉴定；利用蚀斑形成试验及病毒一步生长曲线，分析病毒分离株的增殖特性；RT-PCR方法扩增全基因组序列，进而构建基于P1基因的系统进化树。RT-PCR鉴定结果表明，猪场水疱性疾病的样品中只有A型塞内卡病毒(SVA)核酸呈阳性；细胞分离和IFA鉴定结果表明，成功分离到的1株病原为SVA，并命名为SVA/HN/2020，该分离株能够与SVA免疫家兔多抗发生特异性反应；蚀斑试验和病毒一步生长曲线结果表明，该毒株能够在BHK-21细胞层上形成蚀斑，并在感染后的第16小时病毒滴度达到最高为1×109.5TCID50/100μL；全基因组测序结果表明，该毒株基因组全长7 279 bp(不含Poly A)，开放阅读框为6 546 bp，可编码含2 181个氨基酸残基的多聚蛋白；其中P1基因大小为2 574 bp，其核苷酸序列分析显示，该分离株与在我国分离的SVAHB/CH/2016和SVA CH/01/2015的同源性最高，为99.6%～99.7%，而与2018-2020年间从广东、广西、河南、河北等地的分离毒株的同源性为95.6%～97.0%。结论：本研究成功分离到1株SVA分离株，为进一步研究SVA致病机制及防控技术研发奠定了基础。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 东北农业大学