知母皂苷A-Ⅲ调控ASAP1-IT1/DNMT3b/YAP1轴在非小细胞肺癌中的作用机制研究

作者：付相君; 王梅; 张远; 李艳娜; 耿彪; 赵文英^*

来源：包头医学院学报, 2022, 38(11): 10-33.

DOI：10.16833/j.cnki.jbmc.2022.11.003

• 二磷酸腺苷核糖化因子鸟苷酸激酶1-内含子转录因子1
• Yes相关蛋白1
• 非小细胞肺癌
• 知母皂苷A-Ⅲ

目的:研究知母皂苷A-Ⅲ(timosaponin A-Ⅲ,TAⅢ)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)生长的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度TAⅢ(5、10、15、20、25、30μmol/L)处理非小细胞肺癌细胞A549,使用CCK8法检测细胞活力。以定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测二磷酸腺苷核糖化因子鸟苷酸激酶1-内含子转录因子1 (adenosine diphosphate ribosylation factor guanylate kinase 1-intronic transcript 1,ASAP1-IT1)、Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)在组织及细胞中的表达。以EDU、流式细胞术和Western blot检测ASAP1-IT1、DNA(胞嘧啶-5-)-甲基转移酶3β(DNA (cytosine-5-)-methyltransferase 3 beta, DNMT3b)、YAP1对细胞增殖情况、细胞凋亡率及其相关基因(Bax和caspase-3)与抗凋亡基因Bcl2的影响。亚硫酸氢盐测序聚合酶链式反应(Bisulfite sequencing PCR, BSP)分析检测ASAP1-IT1与YAP1的关系。RNA免疫沉淀法(RNA binding protein immunoprecipitation, RIP)和qRT-PCR法检测ASAP1-IT1与DNMT3b之间的相互作用。免疫共沉淀实验(Co-immunoprecipitation, Co-IP)检测DNMT3b与YAP1之间的关系。采用qRT-PCR方法检测TAⅢ对ASAP1-IT1/DNMT3b/YAP1轴相关基因表达的影响。结果:ASAP1-IT1和YAP1在NSCLC组织和A549细胞中表达上调，而DNMT3b表达下调，加入TAⅢ可逆转这些效应。沉默ASAP1-IT1和YAP1、过表达DNMT3b或应用TAⅢ可增加A549细胞凋亡率和细胞凋亡相关指数。TAⅢ有逆转沉默或过表达ASAP1-IT1、DNMT3b和YAP1的作用。最后发现ASAP1-IT1与DNMT3b相互作用，而DNMT3b与YAP1相互作用。结论:ASAP1-IT1/DNMT3b/YAP1轴通过调节细胞增殖和凋亡促进NSCLC进展。TAⅢ通过调节ASAP1-IT1/DNMT3b/YAP1轴抑制肺癌细胞增殖，促进其凋亡。

• 单位
  皖南医学院