利用CRISPR/Cas-9技术抑制热休克蛋白Gp96的表达对小鼠酒精性肝纤维化的影响

作者：朱文枫; 李三强^*; 宋晓改; 郭威; 杨欢; 张兵兵

来源：解剖学报, 2021, 52(05): 777-783.

DOI：10.16098/j.issn.0529-1356.2021.05.016

• 热休克蛋白Gp96
• 酒精性肝纤维化
• 规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9
• 免疫印迹法
• 小鼠

目的探讨热休克蛋白Gp96对小鼠酒精性肝纤维化的影响。方法健康雄性C57BL/6 J小鼠220只,随机分为4组:正常对照组(n=10),生理盐水+酒精诱导纤维化组(n=70)。尾静脉注射CRISPR表达质粒Gp96-sgRNA3+酒精诱导肝纤维化组(n=70),腹腔注射核因子κB(NF-κB)抑制剂PDTC+酒精诱导肝纤维化组(n=70)。于酒精诱导第8周眼球取血后处死各组小鼠,测定各组小鼠血清谷草转氨酶(AST)活性,HE染色检测各组小鼠肝脏病理变化,天狼猩红染色检测各组小鼠肝纤维化情况,过碘酸-雪夫(PAS)染色检测各组小鼠肝糖原变化情况;免疫印迹法检测小鼠肝脏Gp96和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达变化。结果与正常对照组相比,其余3组AST酶活性显著上升,肝纤维化加重,糖原显著减少(P <0.01);与生理盐水+酒精组相比,注射质粒Gp96-sg RNA3+酒精组和注射NF-κB抑制剂+酒精组AST上升更为明显,肝纤维化更严重,糖原减少更多,Gp96表达显著下降,TGF-β1表达显著增加(P<0.01或P<0.05)。结论尾静脉注射CRISPR表达质粒Gp96-sgRNA3显著抑制了小鼠肝脏Gp96的表达,促进了小鼠酒精性肝纤维化程度,NF-κB信号通路对Gp96的表达起到一定的调控作用。

• 单位
  河南科技大学; 分子医学重点实验室