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摘要
目的研究EBF1基因下调对肺腺癌A549细胞体内外增殖的影响,并初步探讨其机制。方法通过免疫组化染色和PCR检测EBF1在肺癌组织和肺癌细胞系中的表达情况。根据本实验室设计的针对EBF1的干扰RNA(shRNA)序列作为靶序列,一条随机序列作为阴性对照,构建重组逆转录病毒并将其转染入A549细胞中,分别作为shRNA-EBF1组及shRNA-control组;应用PCR和Western blot检测对EBF1基因的沉默效果;应用MTT比色法及BrdU染色法实验检测EBF1-shRNA对A549及H441细胞体外增殖的影响;利用Transwell实验及划痕实验检测EBF1-shRNA对A549细胞体外侵袭及迁移能力的影响;利用流式细胞仪分析EBF1-shRNA对A549细胞周期的影响;通过裸鼠腋窝皮下接种A549细胞,观察EBF1-shRNA对A549细胞在裸鼠体内致瘤能力的影响;Western blot检测CDK6、P21、P27蛋白表达。结果 EBF1在癌旁组织及肺癌组织中的基质细胞中不表达,非小细胞肺癌细胞系A549和H441及小细胞肺癌细胞系H209和H1155中均检测到EBF1基因表达。EBF1-shRNA有效地沉默了EBF1基因mRNA和蛋白的表达;沉默EBF1基因的表达能够抑制A549细胞的体内外增殖能力,使细胞周期阻滞于G1期;沉默EBF1基因的表达后,shRNA-EBF1组细胞中CDK6蛋白表达降低,P21、P27蛋白增加。结论 EBF1-shRNA可能通过使细胞周期阻滞于G1期来抑制肺腺癌细胞A549在体内外增殖能力,这种抑制作用涉及CDK6表达下降以及P21及P27的表达上调。
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